抗氨芐青霉素大腸桿菌的分離、培養(yǎng)及計數(shù)

 接下來喆圖小編就來說說抗氨芐青霉素大腸桿菌如何進(jìn)行分離、培養(yǎng)和計數(shù)及實驗所需材料和藥品 ：

  待分離的大腸桿菌菌液、高壓蒸汽滅菌鍋、LB固體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基、接種環(huán)、玻璃三角刮刀、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、超凈工作臺、酒精燈、9ml無菌水、移液槍

  1、實驗需要制備并使用選擇培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選效率。

   2、分離單克隆菌落采用平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，即菌落。  

   3、使用LB液體培養(yǎng)基并放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單克隆菌落以達(dá)到擴(kuò)大培養(yǎng)的目的。  

   4、稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液（10^5,10^6,10^7）分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。  

    5、用無菌水稀釋菌液：取一毫升液體培養(yǎng)基基液加入一瓶含有9ml 的無菌水中，放入恒溫振蕩器中震蕩使液體充分?jǐn)U散。取震蕩后溶液中的1ml液體加入另一瓶無菌水中，震蕩，重復(fù)此步操作，進(jìn)行梯度稀釋，每一步濃度稀釋到之前的十分之一。

     6、計數(shù)時，選擇未污染的培養(yǎng)基計數(shù)。使用記號筆在培養(yǎng)基表面標(biāo)記，并使用計數(shù)器計數(shù)菌落個數(shù)。

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