釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備、轉(zhuǎn)化

接下來(lái)喆圖小編給大家講講釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備方法：

（1）從YPD平板上挑取一個(gè)新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養(yǎng)基，30℃，250 rpm 培養(yǎng)過(guò)夜。

（2）測(cè)定過(guò)夜培養(yǎng)物的OD600值為3.0~5.0之間。

（3）將10 ml YPD過(guò)夜培養(yǎng)物稀釋至OD600值為0.2~0.4。

（4）在28~30℃恒溫培養(yǎng)搖床中繼續(xù)培養(yǎng)3~6 hr，使其OD600值達(dá)到0.6~1.0。

（5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細(xì)胞，棄上清。

（6）用10 ml 洗液洗酵母細(xì)胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細(xì)胞，棄上清。

（7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細(xì)胞，以每管50 μl 分裝。

接下來(lái)是釀酒酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化

（1）取50 μl 感受態(tài)細(xì)胞，再加入待轉(zhuǎn)質(zhì)粒各2 μl，混勻。

（2）加入500 μl 轉(zhuǎn)化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。

（3）30℃恒溫培養(yǎng)搖床中恒溫1 h，隔15min彈擊管壁混勻。

（4）加入1毫升YPD培養(yǎng)液，30℃恒溫培養(yǎng)搖床中培養(yǎng)1小時(shí)。

（5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。

（6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應(yīng)的SD平板放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后，再倒置過(guò)來(lái)放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過(guò)夜。在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開(kāi)為好。注意白色菌斑。

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