抑菌實驗

一、 菌種

(一)、細(xì)菌：大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草桿菌（Bacillus subtilis） 和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；

(二)、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）、米曲霉（Aspergillus  oryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus  niger）、葉點霉（Phyllosticta maydis ）和刺盤孢霉（Colletotrichum musae）

二、 培養(yǎng)基

（一） 細(xì)菌培養(yǎng)液：LB

液體：胰蛋白胨10.0g  酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L    pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基，加15.0g瓊脂糖/L

(二)、真菌培養(yǎng)液：馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂  18.0g， 蒸餾水                1000mL pH 自然

三、    器材

培養(yǎng)皿（90mm）、濾紙、三角耙、接種環(huán)、試管

四、 實驗步驟

(一)、抑菌圈的測定(濾紙片法)

1、菌種接種  將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次，使菌種新鮮，細(xì)菌置30℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d，霉菌置27℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d，備抗菌實驗用

2、菌懸液制備  在超凈臺里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL)，接種環(huán)輕刮菌落，搖晃，置旋渦混合器混勻。

3、倒平板  在超凈臺里將培養(yǎng)基倒入平板，每板約15mL左右，水平放置，凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中，2d后觀察是否有菌落生長，若沒有則可供下一步實驗使用，否則需重新倒平板。

4、涂布在超凈臺里用槍取0.1ml菌懸液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均勻，每種菌設(shè)置兩個重復(fù)平板。

5、貼片在超凈臺里將平板平均分為6個區(qū)，對角設(shè)置平行組，同時用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼，用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后，取出貼在平板的位置，輕摁一下使濾紙片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。

6、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)菌30℃，霉菌27℃。細(xì)菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，霉菌72h后觀察結(jié)果。

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