用37℃培養(yǎng)箱制備感受態(tài)

      今天喆圖小編來說說在實(shí)驗(yàn)中，為了獲得純的重組質(zhì)粒DNA，需要允許外源DNA分子進(jìn)入的細(xì)胞。經(jīng)過一些特殊方法處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變，成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的細(xì)胞，即感受態(tài)細(xì)胞。

     那么感受態(tài)如何制備，喆圖小編就來給大家說一說它的基本制備步驟：

    ①、從37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-20 h的平板中挑取一個(gè)單菌落(直徑2-3 mm)，轉(zhuǎn)到一個(gè)含有100 ml LB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37℃劇烈振搖培養(yǎng)3 h。一般經(jīng)驗(yàn)，1 OD600約含有大腸桿菌DH5α 109 個(gè)/mL。

    ②、將細(xì)菌轉(zhuǎn)移到一個(gè)無菌、一次性使用的、用冰預(yù)冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培養(yǎng)物冷卻至0℃。

    ③、于4℃用Sorvall GS3特頭以4 100 r/min離心10 min，以回收細(xì)胞。

    ④、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養(yǎng)液流盡。

    ⑤、每50 ml初始培養(yǎng)液用30 ml預(yù)冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重懸每份細(xì)胞沉淀。

    ⑥、于4℃用Sorvall GS3轉(zhuǎn)頭以41 00 r/min離心10 min，以回收細(xì)胞。

    ⑦、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養(yǎng)液流盡。

    ⑧、每50 ml初始培養(yǎng)物用2 ml用冰預(yù)冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重懸每份細(xì)胞沉淀。

    ⑨、此時(shí)可以用新鮮制備的感受態(tài)細(xì)胞直接做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，也可以將細(xì)胞凍存于- 40℃的低溫保存箱中。

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