培養(yǎng)細胞時的充分準備

      接下來喆圖小編就來說說培養(yǎng)細胞時該準備那些東西，包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

      玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿要先用洗衣粉刷干凈，然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 8-10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，放于鼓風干燥箱中160℃烘烤 2 h 待用。

      試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

     無菌檢驗，主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等，有些可以采用高壓滅菌。

      試劑分裝保存，包括營養(yǎng)液、胰酶、血清等。

      血清特別重要，血清必須貯存于 –20℃的低溫保存箱中，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。

       瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

       熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已*解凍血清。恒溫水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清對細胞的影響。

       實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。

       每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。

       無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。

      小心取用無菌實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

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