用恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)初代細(xì)胞

     今天喆圖小編給大家講講初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng)，是從供體獲取組織后的培養(yǎng)。其蕞大優(yōu)點(diǎn)是：組織和細(xì)胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來(lái)源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下，在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。
     合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法，能把組織塊分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，便于細(xì)胞從培養(yǎng)液中攝取營(yíng)養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物，細(xì)胞能較快地長(zhǎng)成單層。本法尤適用于培養(yǎng)大量組織，細(xì)胞產(chǎn)量高；但用于經(jīng)常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣，無(wú)菌操作不良時(shí)且易污染。
     首先講講實(shí)驗(yàn)方法：

     實(shí)驗(yàn)材料：試劑、試劑盒 Hanks、培養(yǎng)液、胰蛋白酶
     實(shí)驗(yàn)所需儀器、耗材：恒溫水浴鍋、吸管、平皿、培養(yǎng)瓶、恒溫培養(yǎng)箱、燒杯、攪拌器、三角燒瓶、不銹鋼篩、眼科剪、眼科鑷、計(jì)數(shù)板、CO2培養(yǎng)箱等等。
      實(shí)驗(yàn)步驟：
     1. 準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20 分鐘；
     2. 布局：點(diǎn)燃煤氣燈，安裝吸管帽（應(yīng)通過火焰）；

     3. 處理組織：把組織塊置入燒杯中，用Hanks液漂洗2~3 次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘；
     4. 剪切：用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊（用手術(shù)刀割亦可），以便于消化；加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞；
     5. 消化：或用恒溫水浴鍋，或置入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中消化均可，消化中每隔20 分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次；消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定；
     6. 分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊；低速離心消化液5 分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液；
     7. 計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中；對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說，pH 要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說膽液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整；
     8. 培養(yǎng)：置入36.5 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；如果用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需更換新塞。
注意事項(xiàng)：
     9. 組織塊、胰蛋白酶、培養(yǎng)液等易受紫外線傷害的物品，*在培養(yǎng)時(shí)再攜入操作野；如預(yù)先置入，需用紙張覆蓋，以免受射線影響；開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

     以上內(nèi)容由喆圖小編編輯發(fā)布，如需了解詳情請(qǐng)聯(lián)系喆圖客服！