用帖壁法純化巨噬細胞

1． 用含 20 ％～ 40 ％小牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液將巨噬細胞配成 2 × 10⁶ ～ 4 × 10⁶ /ml 的濃度。以每平方厘米 2 × 10⁵ ～ 4 × 10⁵ 個巨噬細胞的密度將細胞懸液接種到玻璃培養(yǎng)皿（瓶）或塑料培養(yǎng)皿（瓶）中。 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1 小時或 24 小時。 1 小時培養(yǎng)節(jié)省時間但會丟失一些粘附力弱的巨噬細胞，而 24 小時可以得到較多的巨噬細胞。 20 ％～ 40 ％的小牛血清可以減少 B 淋巴細胞的粘附。

2． 搖晃培養(yǎng)皿（瓶），懸浮未粘附細胞，吸出細胞懸液。用預(yù)溫的 Hanks 液洗滌細胞 3 ～ 4 次。懸浮細胞可重復(fù)粘附，得到更多巨噬細胞。用適量含 2.5mmol/L EDTA 的無鈣鎂 Hanks 液消化細胞 37 ℃ 15 ～ 30 分鐘。用吸管吹打分離細胞，離心 250 × g 10 分鐘，去上清液。

3． 用預(yù)冷的 Hanks 液洗滌細胞 3 ～ 4 次，每次離心 250 × g 10 分鐘，去上清液。最后用含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液懸浮細胞，臺盼藍染色計數(shù)細胞并決定細胞活力，將細胞配成所需的濃度。