使用霉菌培養(yǎng)箱完成對SD大鼠熱應激模型的制作

中國南方普遍發(fā)生的高溫又使這一疾病受到更多重動物模型是研究疾病的有力工具，國內(nèi)針對大鼠熱應激模型的制作方法和程序的報道很少，而以其為檢測工具的報道很多，而且控制條件和方法不盡相同，冷雪等選用180~200g雄性Wistar大鼠，溫度38℃，相對濕度80%，熱攻擊1h，最終以肛溫、心電圖等評價；高峰等“選用SD大鼠，溫度44℃，熱攻擊2h，最后檢測血清GSH-Px、MDA、IL-2等活性或含量鑒定：陳琦等亦選用SD大鼠，溫度41℃，相對濕度60%，熱攻擊2h，最后根據(jù)行為變化和肝臟Hsp70表達量鑒定。

以上報道的大鼠熱應激模型制作手段和評價方法差異較大，娜琴等認為應激動物模型尚無統(tǒng)一標準，建議評價指標為行為學變化和實驗室相關(guān)檢測指標，并認為Hsp70變化是主因。本研究模擬熱應激自然發(fā)生的因素，結(jié)合前人經(jīng)驗以及大鼠自身的生理特點，試圖建立比較合理的大鼠熱應激模型，以行為變化、剖檢變化、血清酶活性、抗氧化指標和肝臟Hsp70表達量為標準進行驗證，本期為大鼠熱應激模型標準化建立、體溫調(diào)究、節(jié)相研關(guān)熱性病的預防和治療提供參考。

材料與方法

材料

實驗動物SD大鼠20只，雄性，清潔級，體(205g*60)g，2009-0004J，按照國家實驗動物環(huán)境標準(GB14925-2010)◎養(yǎng)。.L.1.2試及設(shè)備Na離子試盒、K*離子試劑盒、白白試劑盒、總蛋白試制盒，堿性磷酸試制盒、谷丙轉(zhuǎn)氨試劑盒、肌酸請酸肌試劑盒、乳脫氫試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、再二試劑盒、超氧化物線化酶測試盤。霉菌培養(yǎng)箱。pH530型pH測定儀

方法

精智分組及模型復制SD大鼠隨機分為兩組，組為一對照組，二組為模型組。一組在22℃屏障系境統(tǒng)內(nèi)正常飼環(huán)養(yǎng)，二組參考部分文獻*氣*，模，置霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)升溫飼養(yǎng)，溫度為40℃，濕度為50%，2h后自霉菌培養(yǎng)箱取出，行為評價后眼底靜脈叢采血，分離血清后檢測相關(guān)指標。

生理生化指標測定血清[K]、血清[Na]、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血紅蛋白(HB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸磷酸肌酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的測定，均按試劑盒說明書進行。

肝臟HSP70表達量測定用裂解液處理2.0g肝臟組織塊，常規(guī)方法提取總蛋白，BCA法測蛋白濃度，用10%的SDS-PAGE以70V/120V恒定電壓電泳，電泳結(jié)束轉(zhuǎn)至PVDF膜，TBST37℃封閉1h，先后加入HSP70兔抗鼠多克隆抗體和GAPDH鼠抗單克隆抗體，4℃孵育12h；HSP70經(jīng)過TBST洗滌后加入HRP標記的山羊抗兔IgG，37℃孵育1h，TBST再次洗滌，ECL化學發(fā)光試劑顯影檢測：GAPDH4℃孵育后直接以ECL化學發(fā)光試劑顯影檢測。HSP70相對含量以HSP70/GAPDH灰度比值表示。